siRNA是19-23nt的雙鏈RNA小分子,這種小分子在細(xì)胞中首先被一種稱為Dicer的RNA酶切割,隨后與細(xì)胞中的某些酶和蛋白質(zhì)形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(RNA-induced silencing complexes , RISCs),進(jìn)而解開(kāi)雙鏈并通過(guò)反義鏈與細(xì)胞內(nèi)mRNA分子發(fā)生特異性結(jié)合,導(dǎo)致mRNA分子降解,從而抑制特定基因的表達(dá)。RNAi技術(shù)已經(jīng)成為功能基因組學(xué)研究的有力工具,如應(yīng)用在基因敲除、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、功能基因組等研究、基因治療及藥物研究等方面。
siRNA合成的方法主要包括:
1、化學(xué)合成
2、體外轉(zhuǎn)錄
3、長(zhǎng)片斷dsRNA經(jīng)RNaseIII類降解(如Dicer、E.coli、RNaseIII)
4、siRNA表達(dá)載體或者病毒載體在細(xì)胞中表達(dá)sirnas
5、pcr制備的siRNA表達(dá)框在細(xì)胞中表達(dá)
前三種方法主要都是體外制備siRNAs,并且需要專門(mén)的RNA轉(zhuǎn)染試劑將siRNAs轉(zhuǎn)到細(xì)胞內(nèi)。后兩種方法的優(yōu)點(diǎn)在于不需要直接操作RNA,依賴能夠表達(dá)siRNAs的DNA載體或者表達(dá)框轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。每種方法都有有缺點(diǎn),具體那種方法最好取決于試驗(yàn)?zāi)康摹?/p>
(資料來(lái)源:金斯瑞、百度百科)