細(xì)胞凋亡檢測(cè)
2019年6月20日
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細(xì)胞凋亡（Cell Apoptosis）是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡不是一件被動(dòng)的過程，而是主動(dòng)過程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用。
細(xì)胞凋亡（Cell Apoptosis）是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡不是一件被動(dòng)的過程，而是主動(dòng)過程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用。
穩(wěn)定細(xì)胞株，一般是將外源DNA克隆到具有某種抗性或選擇基因的載體上，載體被轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞并整合到染色體中，用載體中所含的選擇標(biāo)志進(jìn)行篩選，篩選得到可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株。
微生物培養(yǎng)，是指借助人工配制的培養(yǎng)基和人為創(chuàng)造的培養(yǎng)條件（如培養(yǎng)溫度等），使某些（種）微生物快速生長繁殖，稱為微生物培養(yǎng)。微生物培養(yǎng)可分為純培養(yǎng)和混合培養(yǎng)，前者是指對(duì)已純化的單一菌種進(jìn)行培養(yǎng)和利用；
微生物種類繁多，總數(shù)龐大，針對(duì)不同的微生物對(duì)能量、營養(yǎng)和理化條件的需求不同（包括各因子的種類和濃度不同），對(duì)現(xiàn)有培養(yǎng)基經(jīng)過適當(dāng)?shù)膬?yōu)化改造可以用于新的微生物的分離培養(yǎng)。
常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類，一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（永久轉(zhuǎn)染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分析。
耐藥細(xì)胞株的建立實(shí)驗(yàn)是通過細(xì)胞與低劑量的藥物長期接觸，引起細(xì)胞本身生物化學(xué)過程的改變，細(xì)胞膜上出現(xiàn)Pgp（或P-170）糖蛋白，使細(xì)胞逐漸對(duì)藥物耐受。隨著藥物濃度的遞增，其耐受程度逐漸加強(qiáng)。
將外源基因?qū)肽康募?xì)胞，并得到穩(wěn)定的表達(dá)是細(xì)胞生物學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)手段。但是，對(duì)于特定類型的細(xì)胞，電轉(zhuǎn)和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染往往難以取得理想的效果。使用質(zhì)量有保證的慢病毒進(jìn)行感染可以突破此類實(shí)驗(yàn)瓶頸。
研究某個(gè)基因的功能最常用的手段是在宿主細(xì)胞中過表達(dá)或者沉默該基因，篩選穩(wěn)定細(xì)胞系。針對(duì)難轉(zhuǎn)染的干細(xì)胞，可以建立標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)服務(wù)體系，結(jié)合高效的慢病毒系統(tǒng)，可以準(zhǔn)確地將目的基因和示蹤基因轉(zhuǎn)染到目的細(xì)胞中，得到穩(wěn)定表達(dá)或沉默特定基因的細(xì)胞株。
胚胎干細(xì)胞(ESCs)/誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS cell)誘導(dǎo)生成的指定的細(xì)胞，即干細(xì)胞誘導(dǎo)分化。胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell, ESC)是從早期囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(inner cell mass, ICM)分離出來的一種多能細(xì)胞系；
干細(xì)胞（Stem cell）即起源細(xì)胞，是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞。在細(xì)胞的分化過程中，細(xì)胞往往由于高度分化而完全失去了再分裂的能力，最終衰老死亡。
干細(xì)胞研發(fā)是一項(xiàng)技術(shù)性和經(jīng)驗(yàn)性極強(qiáng)的工作，對(duì)于研究者來說是一項(xiàng)長時(shí)間、高消耗的投入。很多研究者用幾個(gè)月甚至幾年的時(shí)間，投入大量精力和費(fèi)用，卻得不到高質(zhì)量的干細(xì)胞；即使得到干細(xì)胞也才僅僅實(shí)現(xiàn)了第一步，即建立一個(gè)科研工具。
干細(xì)胞鑒定主要方法：1、克隆形成率：在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中克隆形成率是評(píng)鑒細(xì)胞增殖能力的重要指標(biāo)，如誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS）誘導(dǎo)過程中克隆形成率是判定誘導(dǎo)效率的主要指標(biāo)。
分子量是有機(jī)化合物基本的理化性質(zhì)參數(shù)。分子量正確與否往往代表著所測(cè)定的有機(jī)化合物及生物大分子的結(jié)構(gòu)正確與否。分子量也是多肽、蛋白質(zhì)等鑒定中首要的參數(shù)，也是基因工程產(chǎn)品報(bào)批的重要數(shù)據(jù)之一。
氨基酸N端測(cè)序：目前對(duì)蛋白N端測(cè)序主要分類兩大類，其一為非質(zhì)譜技術(shù)，例如經(jīng)典的Edman降解法；其二為質(zhì)譜技術(shù)。
免疫組織化學(xué)檢測(cè)，即免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，
在研究分子間相互作用的道路上，人們不斷探索，總結(jié)出很多方法，免疫技術(shù)，晶體衍射，核磁共振等。1948年，熒光共振能量轉(zhuǎn)移（Fluorescence resonance energy transfer，F(xiàn)RET）理論被首次提出，它可以測(cè)定1.0-6.0nm距離內(nèi)分子間的相互作用。1967年，這一理論得到了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，將1.0-6.0nm的距離稱為光學(xué)尺。
血管生成（Angiogenesis）是指源于已存在的毛細(xì)血管和毛細(xì)血管后微靜脈新的毛細(xì)血管性血管的生長。許多疾病與血管生成有密切的關(guān)系，比如腫瘤。腫瘤血管生成是一個(gè)極其復(fù)雜的過程，一般包括血管內(nèi)皮基質(zhì)降解、內(nèi)皮細(xì)胞活化、增殖、遷移、管化分支形成血管環(huán)和新的基底膜等步驟。
大量的研究表明線粒體與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，其中線粒體跨膜電位（MMP）的下降，被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)過程中早發(fā)生的事件之一。它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征（染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂）出現(xiàn)之前,一旦線粒體跨膜電位崩潰，則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。
細(xì)胞周期分為間期與分裂期兩個(gè)階段。間期又分為三期：即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）與DNA合成后期（G2期）。某些細(xì)胞在分裂結(jié)束后暫時(shí)離開細(xì)胞周期，停止細(xì)胞分裂，執(zhí)行一定生物學(xué)功能（G0期）。
細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。