細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)
2019年6月18日
沒(méi)有評(píng)論
細(xì)胞克隆形成率即細(xì)胞接種存活率，表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞成活并形成克隆的數(shù)量。貼壁后的細(xì)胞不一定每個(gè)都能增殖和形成克隆，而形成克隆的細(xì)胞必為貼壁和有增殖活力的細(xì)胞?？寺⌒纬陕史从臣?xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個(gè)重要性狀。
細(xì)胞克隆形成率即細(xì)胞接種存活率，表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞成活并形成克隆的數(shù)量。貼壁后的細(xì)胞不一定每個(gè)都能增殖和形成克隆，而形成克隆的細(xì)胞必為貼壁和有增殖活力的細(xì)胞?？寺⌒纬陕史从臣?xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個(gè)重要性狀。
短串聯(lián)重復(fù)(Short tandem repeats, STR)，又稱微衛(wèi)星DNA(Microsatellite DNA)或簡(jiǎn)單重復(fù)序列(Simple repeat sequence, SRS或SSR)，是廣泛存在于原核生物和真核生物基因組中的核苷酸重復(fù)序列。
上皮細(xì)胞，癌細(xì)胞，角質(zhì)細(xì)胞，在生理狀態(tài)下，形成單層或者復(fù)層上皮，當(dāng)病理狀態(tài)下，比如創(chuàng)傷愈合，細(xì)胞遷移的時(shí)候，以側(cè)向運(yùn)動(dòng)為主，劃痕實(shí)驗(yàn)很好的模擬了這種運(yùn)動(dòng)形式。細(xì)胞劃痕是測(cè)定腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)特性的方法之一，
細(xì)胞分離技術(shù)包括離心技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)和細(xì)胞電泳。離心是研究如細(xì)胞核、線粒體、高爾基體、溶酶體和微體，以及各種大分子基本手段。流式細(xì)胞術(shù)是對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行快速定量分析與分選的一門技術(shù)。
細(xì)胞凍存和細(xì)胞復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣能夠大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存大多數(shù)都采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提升細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。
通過(guò)熒光標(biāo)記抗體和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，細(xì)胞表面標(biāo)記（cell surface marker）能夠用來(lái)確定細(xì)胞亞群，基于來(lái)源，發(fā)育階段和功能。
抗原通常是由多個(gè)抗原決定簇組成的，由一種抗原決定簇刺激機(jī)體，由一個(gè)B淋巴細(xì)胞接受該抗原刺激所產(chǎn)生的抗體稱之為單克隆抗體（Monoclonal Antibody）。由多種抗原決定簇刺激機(jī)體，相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體，
膠體金技術(shù)是以膠體金作為示蹤物來(lái)反映蛋白之間的反應(yīng)情況的一種技術(shù)，通過(guò)肉眼即可判讀檢測(cè)結(jié)果，簡(jiǎn)單方便，從加樣到判讀結(jié)果一般在10分鐘左右。最經(jīng)典的膠體金技術(shù)為早早孕試紙條檢測(cè)，采用雙抗體夾心法制作。
免疫分型可對(duì)免疫細(xì)胞的類型、功能等進(jìn)行快速鑒定。 流式細(xì)胞儀可用于多參數(shù)淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)、免疫表型分析，輔助性T淋巴細(xì)胞分化功能研究，新細(xì)胞亞群鑒定，疾病相關(guān)的特異性亞群鑒定和細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)。
傳統(tǒng)上，根據(jù)胞外或表面表達(dá)的標(biāo)志物不同，流式細(xì)胞術(shù)可用于鑒定多種細(xì)胞匯集池內(nèi)不同的細(xì)胞類型，這種應(yīng)用通常稱為免疫表型分型。然而，這項(xiàng)技術(shù)還可輕松地應(yīng)用于胞內(nèi)靶標(biāo)檢測(cè)，并可成功地應(yīng)用于復(fù)雜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)事件的研究。
通過(guò)將著床前階段的胚胎細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基中，通常使用一層小鼠胚胎皮膚細(xì)胞作為飼養(yǎng)層。飼養(yǎng)細(xì)胞為胚胎干細(xì)胞提供了附著位置并且可以釋放營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)到培養(yǎng)基中。
磁珠分選是借助偶聯(lián)在磁性微粒上抗體高特異性識(shí)別并標(biāo)記目標(biāo)細(xì)胞表面抗原，再讓混有磁珠的細(xì)胞懸液通過(guò)磁場(chǎng)，結(jié)合了磁珠的細(xì)胞被吸附在磁場(chǎng)側(cè)壁上，而未結(jié)合的細(xì)胞被除去，得到純化的目標(biāo)細(xì)胞，從而實(shí)現(xiàn)高效的分選與富集。
細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時(shí)，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上 標(biāo)記的dUTP ，從而可以通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，
細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性的研究，尤其是在腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移中應(yīng)用很廣泛。腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤生物學(xué)特征之一，在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中的某些階段，腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出較強(qiáng)的運(yùn)動(dòng)能力，如腫瘤細(xì)胞從原發(fā)瘤灶分離，進(jìn)而侵入到鄰近組織及再穿過(guò)血管壁進(jìn)入血液循環(huán)和穿出血管壁進(jìn)入繼發(fā)部位等，因而細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性的研究在弄清腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制上有重要地位。
免疫沉淀（immunoprecipitation）是一種純化蛋白質(zhì)的方法。將目標(biāo)蛋白的抗體與細(xì)胞提取物一起孵育，使抗體與溶液中的蛋白質(zhì)結(jié)合。然后利用蛋白 A/G 偶聯(lián)的瓊脂糖微珠從溶液中分離出抗體/抗原復(fù)合物，從而將目標(biāo)蛋白質(zhì)從復(fù)雜樣品中分離出來(lái)。
免疫熒光細(xì)胞化學(xué)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。
3D細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是指將具有三維結(jié)構(gòu)不同材料的載體與各種不同種類的細(xì)胞在體外共同培養(yǎng)，使細(xì)胞能夠在載體的三維立體空間結(jié)構(gòu)中遷移、生長(zhǎng)，構(gòu)成三維的細(xì)胞載體復(fù)合物。
大型動(dòng)物多為皮下或肌肉免疫，但是初次免疫都建議在皮下進(jìn)行。可使用小分子、多肽、修飾多肽、蛋白、融合蛋白、修飾蛋白等作為抗原進(jìn)行多克隆抗體制備。使用山羊或者綿陽(yáng)，年齡約6-10個(gè)月，體重25Kg左右。免疫計(jì)量根據(jù)抗原品系而定。
抗體抗原刺激機(jī)體，產(chǎn)生免疫學(xué)反應(yīng)，由機(jī)體的漿細(xì)胞合成并分泌的與抗原有特異性結(jié)合能力的一組球蛋白，這就是免疫球蛋白，這種與抗原有特異性結(jié)合能力的免疫球蛋白就是抗體。
抗體抗原刺激機(jī)體，產(chǎn)生免疫學(xué)反應(yīng)，由機(jī)體的漿細(xì)胞合成并分泌的與抗原有特異性結(jié)合能力的一組球蛋白，這就是免疫球蛋白，這種與抗原有特異性結(jié)合能力的免疫球蛋白就是抗體。