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RNA甲基化免疫共沉淀技術(shù)(MeRIP)

甲基化RNA免疫共沉淀 (methylated RNA Immunoprecipitation,meRIP)基于特異性抗體特異性結(jié)合甲基化修飾的堿基的原理,以RNA免疫共沉淀富集甲基化修飾片段為基礎(chǔ),然后通過(guò)高通量測(cè)序,在全轉(zhuǎn)錄組范圍內(nèi)研究發(fā)生甲基化的RNA區(qū)域,獲得結(jié)果。

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RNAi-shRNA(發(fā)夾RNA)

ShRNA, 為short hairpin RNA的縮寫,翻譯為“短發(fā)夾RNA”。shRNA包括兩個(gè)短反向重復(fù)序列??寺〉絪hRNA表達(dá)載體中的shRNA包括兩個(gè)短反向重復(fù)序列,中間由一莖環(huán)(loop)序列分隔的,組成發(fā)夾結(jié)構(gòu),

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pull down

蛋白-蛋白相互作用是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能研究中最重要的方面之一。GST pulldown實(shí)驗(yàn)是一個(gè)有效驗(yàn)證酵母雙雜交系統(tǒng)的體外試驗(yàn)技術(shù)。將靶蛋白與GST(谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶)融合表達(dá),并將靶蛋白固化在谷胱甘肽(GSH)親和樹(shù)脂上,作為與目的蛋白親和的支撐物,

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Clip

CLIP,交聯(lián)-免疫沉淀法,是一種主要用于分離和鑒定細(xì)胞中核糖核蛋白復(fù)合體中的RNA、microRNA以及蛋白復(fù)合物的方法。這個(gè)方法可以確定某些RBP是否能與特定的RNA結(jié)合并將RBPs與其結(jié)合的RNA免疫沉淀下來(lái)。

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CHIRP

RNA純化的染色質(zhì)分離技術(shù)(Chromatin Isolation by RNA Purification,ChIRP)是一種檢測(cè)與RNA綁定的DNA和蛋白的高通量檢測(cè)方法。

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TRAP

標(biāo)記RNA親和純化,TRAP(tagged RNA affinity purification)是一種檢測(cè)與RNA結(jié)合的蛋白質(zhì)(RBPs)的檢測(cè)方法。

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RAP

RNA反義純化(RNA antisense Purification,RAP)是一種檢測(cè)轉(zhuǎn)錄后水平與RNA結(jié)合RNA或蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法。

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reverse-ChIP

反向染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(reverse-Chromatin immunoprecipitation assay,reverse-ChIP)相對(duì)于染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(ChIP),是一種在體內(nèi)狀態(tài)下分析DNA-蛋白質(zhì)相互作用的新方法。

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動(dòng)物亞細(xì)胞定位分析

亞細(xì)胞定位是指某種蛋白或表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)的具體存在部位。例如在核內(nèi)、胞質(zhì)內(nèi)或者細(xì)胞膜上存在。GFP是綠色熒光蛋白,在掃描共聚焦顯微鏡的激光照射下會(huì)發(fā)出綠色熒光,從而可以精確地定位蛋白質(zhì)的位置。

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SNP分型

基因分型(Genotyping)是利用生物學(xué)檢測(cè)方法測(cè)定個(gè)體基因型(Genotype)的技術(shù)。 基因組中的遺傳變異以許多不同形式存在,既有大規(guī)模結(jié)構(gòu)性的染色體改變,也有單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP),

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分子標(biāo)記

分子標(biāo)記(Molecular Markers)的概念有廣義和狹義之分。廣義的分子標(biāo)記是指可遺傳的并可檢測(cè)的DNA序列或蛋白質(zhì)。狹義分子標(biāo)記是指能反映生物個(gè)體或種群間基因組中某種差異的特異性DNA片段。

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BIFC載體構(gòu)件

雙分子熒光互補(bǔ)(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)分析技術(shù),是由Hu等在2002年最先報(bào)道的一種直觀、快速地判斷目標(biāo)蛋白在活細(xì)胞中的定位和相互作用的新技術(shù)。

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啟動(dòng)子研究載體構(gòu)件

啟動(dòng)子載體,據(jù)啟動(dòng)子序列特性,從基因組中調(diào)取啟動(dòng)子序列,將其構(gòu)建至報(bào)告基因載體中,通過(guò)檢測(cè)報(bào)告基因來(lái)分析啟動(dòng)子關(guān)鍵區(qū)域;同時(shí)可以通過(guò)構(gòu)建一系列截短體啟動(dòng)子和定點(diǎn)突變可以確定關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。

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基因編輯(CRISPR/Cas9)載體構(gòu)件

CRISPR Cas9為新型的基因組編輯技術(shù),擁有操作簡(jiǎn)單,效率高,以及作用靶點(diǎn)多等優(yōu)勢(shì),逐漸成為基因敲除,基因組突變和基因敲除等實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)操作工具。Cas9系統(tǒng)能在293T, K562, iPS等多種細(xì)胞中,進(jìn)行有效的靶向酶切,

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干擾載體構(gòu)件(RNAi載體)

RNA 干擾(RNA interference, RNAi)技術(shù),是將與內(nèi)源mRNA 編碼區(qū)同源的小片段(19~23 bp)外源雙鏈 RNA(siRNA)導(dǎo)入細(xì)胞中,引發(fā)細(xì)胞中相應(yīng)mRNA 高效特異性降解,從而導(dǎo)致特定基因表達(dá)沉默(knock down)的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。

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原核表達(dá)載體構(gòu)件

原核表達(dá)系統(tǒng)是將外源cDNA片段克隆到原核表達(dá)載體上然后轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株,在原核生物來(lái)表達(dá)外源蛋白的系統(tǒng),主要包括大腸桿菌表達(dá)、枯草芽孢桿菌表達(dá)、鏈霉素表達(dá)等。

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文庫(kù)構(gòu)建-差減文庫(kù)

差減文庫(kù) ( Subtractive cDNA library) 也稱扣除文庫(kù)、差減cDNA文庫(kù)、抑制性消減文庫(kù)(Suppression Subtractive hybridization, SSH)。減法雜交的本質(zhì)是除去那些普遍共同存在的cDNA序列,從而使欲分離的目的基因的序列得到有效的富集,提高了分離的敏感性。

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文庫(kù)構(gòu)建-cDNA文庫(kù)

cDNA 文庫(kù)(cDNA library ): 是指某種生物基因組轉(zhuǎn)錄的全部mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的cDNA片段分別與克隆載體(常用噬菌體或質(zhì)粒載體)重組,并將其引入到相應(yīng)的宿主細(xì)胞中(一般為E.coli.)繁殖和擴(kuò)增,則每個(gè)細(xì)菌含有一段cDNA,

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文庫(kù)構(gòu)建-gDNA文庫(kù)

gDNA文庫(kù)即基因組DNA(genomic DNA)文庫(kù),又稱基因組文庫(kù)(Genomic Library),把某種生物基因組的全部遺傳信息通過(guò)克隆載體貯存在一個(gè)受體菌克隆子群體中,這個(gè)群體即為這種生物的基因組文庫(kù)。

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拷貝數(shù)變異(CNV)

拷貝數(shù)變異(Copy number variation, CNV)是由基因組發(fā)生重排而導(dǎo)致的, 一般指長(zhǎng)度為1 kb 以上的基因組大片段的拷貝數(shù)增加或者減少, 主要表現(xiàn)為亞顯微水平的缺失和重復(fù)。CNV 是基因組結(jié)構(gòu)變異(Structuralvariation, SV) 的重要組成部分。

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