昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)是四大表達(dá)系統(tǒng)(昆蟲細(xì)胞、細(xì)菌、酵母、哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng))之一。昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)原理是通過轉(zhuǎn)座作用將轉(zhuǎn)移載體中的表達(dá)組件定點(diǎn)轉(zhuǎn)座到能在大腸桿菌中增殖的桿狀病毒穿梭載體(Bacmid)上,通過抗性和藍(lán)白斑篩選到重組穿梭質(zhì)粒,提取穿梭質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞后得到的子代病毒即為重組病毒。將病毒上清浸染昆蟲細(xì)胞,獲得表達(dá)的重組蛋白。
桿狀病毒是一類閉合環(huán)狀雙鏈病毒,病毒粒子呈桿狀,以昆蟲為主要宿主。桿狀病毒還是一種出芽型分泌性病毒粒子,在感染細(xì)胞后能迅速在培養(yǎng)細(xì)胞中水平傳播而保持細(xì)胞在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)不裂解,從而最大限度地保持了外源蛋白的穩(wěn)定,昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)又被稱為昆蟲桿狀病毒系統(tǒng)。
目前研究較多的是苜蓿銀紋夜蛾核多角體 (AcNPV) ,其宿主是草地貪夜蛾。而sf9細(xì)胞,正是桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的宿主細(xì)胞之一。sf9細(xì)胞屬于半貼壁型細(xì)胞系,可以進(jìn)行懸浮培養(yǎng),也可以進(jìn)行貼壁培養(yǎng),在應(yīng)用于蛋白的表達(dá)與制備純化中,有著許多的優(yōu)點(diǎn)。
1、與其他真核表達(dá)系統(tǒng)相比,外源基因表達(dá)水平高,特別是細(xì)胞內(nèi)蛋白。多數(shù)情況下,表達(dá)的重組蛋白可溶,折疊正確有翻譯后修飾(如糖基化等),有生物學(xué)活性,容易分離純化;
2、昆蟲細(xì)胞懸浮生長(zhǎng),容易放大培養(yǎng),有利于大規(guī)模表達(dá)重組蛋白;
3、易于表達(dá)異源多聚體蛋白,可通過多種重組病毒同時(shí)感染昆蟲細(xì)胞或用含有多個(gè)表達(dá)框的一種病毒感染昆蟲細(xì)胞來實(shí)現(xiàn);
4、安全性。昆蟲桿狀病毒不感染脊椎動(dòng)物。

(資料來源:云克隆、強(qiáng)耀生物)