微生物多樣性測序,又稱擴增子測序,是對特定長度的PCR產(chǎn)物或者捕獲的片段進行測序,分析序列中的變異。16S/18S/ITS等擴增子測序即通過提取環(huán)境樣品的DNA,選擇合適的通用引物擴增16S/18S/ITS的某一或某幾個區(qū),使用Illumina MiSeq將目的區(qū)域正反向讀通,通過檢測目的區(qū)域的序列變異和豐度,對環(huán)境樣本物種分類及豐度,種群結(jié)構,系統(tǒng)進化,群落比較等方面信息進行分析的研究方法。
16S rDNA:是細菌分類學研究中常用的“分子鐘”,其序列包含9個可變區(qū)(Variable region)和10個保守區(qū)(Constant region)??勺儏^(qū)因細菌而異,且變異程度與細菌的系統(tǒng)發(fā)育密切相關。通過檢測16S rDNA的序列變異和豐度,可以了解環(huán)境樣品中群落多樣性信息?;?6S rDNA的分析在微生物分類鑒定,微生態(tài)研究等方面起到重要作用。
18S rDNA測序:18S rDNA是編碼真核生物核糖體小亞基rDNA的DNA序列,具有9個保守區(qū)域和8個可變區(qū)域,對18S rDNA某個高可變區(qū)進行測序,用于研究環(huán)境微生物中真核微生物的群落結(jié)構多樣性。系統(tǒng)發(fā)育研究中較適用于種級以上階元的分類。
ITS測序:ITS(Internal Transcribed Spacer)分為兩個區(qū)域,ITS1和ITS2;ITS1位于真核生物rDNA序列18S和5.8S之間,ITS2位于真核生物rDNA序列5.8S和28S之間;對ITS1或ITS2進行測序,用于研究環(huán)境微生物中真菌群落結(jié)構多樣性。系統(tǒng)發(fā)育研究中利用它可研究種及種以下的分類階元。
(資料來源:華大基因、菲沙基因,聚生物整理)