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蛋白復(fù)性
(Protein refolding)
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技術(shù)待認(rèn)領(lǐng)

技術(shù)概述

蛋白質(zhì)因受某些物理或化學(xué)因素的影響,分子的空間構(gòu)象被破壞,從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)發(fā)生改變并失去原有的生物學(xué)活性的現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的變性作用(denaturation)。變性作用并不引起蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的破壞,而是二級結(jié)構(gòu)及以上的高級結(jié)構(gòu)的破壞,變性后的蛋白質(zhì)稱為變性蛋白。

在變性條件不劇烈,變性蛋白質(zhì)內(nèi)部結(jié)構(gòu)變化不大時(shí),除去變性因素,在適當(dāng)條件下變性蛋白質(zhì)可恢復(fù)其天然構(gòu)象和生物活性,這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的復(fù)性(renaturation)。

但在實(shí)際研究中發(fā)現(xiàn),在體外折疊時(shí),蛋白質(zhì)分子間由于存在大量錯(cuò)誤折疊和聚合,復(fù)性效率往往很低。究其原因,蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu)雖然由其氨基酸順序決定,然而伸展肽鏈折疊為天然活性結(jié)構(gòu)的過程還受到周圍環(huán)境的影響。蛋白質(zhì)復(fù)性實(shí)驗(yàn)是一個(gè)復(fù)雜的過程。

基本流程

從破碎細(xì)胞開始,然后將細(xì)胞勻漿離心,回收包涵體后,加入變性劑溶解包涵體,使之成為可溶性伸展態(tài),再通過透析等除去變性劑使表達(dá)產(chǎn)物折疊恢復(fù)天然構(gòu)象及活性。

考慮到不同蛋白質(zhì)包涵體的特定結(jié)構(gòu)與理化特性,采用不同的變性變復(fù)性方法。復(fù)性條件包括pH、溫度、蛋白濃度、離子濃度等。復(fù)性輔助劑包括分子伴侶、氧化還原對等。獲得高品質(zhì)可溶活性蛋白。

(資料來源:百度百科、第八章基因工程下游技術(shù))

技術(shù)詳情

(XXX編輯,XXX修善)

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