技術概述
膠體金技術是以膠體金作為示蹤物來反映蛋白之間的反應情況的一種技術,通過肉眼即可判讀檢測結果,簡單方便,從加樣到判讀結果一般在10分鐘左右。
最經(jīng)典的膠體金技術為早早孕試紙條檢測,采用雙抗體夾心法制作。
如圖,當陽性尿液從左側滴加進去后,HCG首先層析到金標抗體處與之特異性結合,再繼續(xù)流動到第一條紅線檢測線處。此處包被有抗體,與金標結合物結合的HCG就會被此處抗體特異性地捕獲結合形成抗體-抗原-抗體這樣的夾心產物并停留在此處。當足夠量的結合物在此處聚集后,肉眼能夠觀測得到一條鮮紅的條帶,結果就為陽性。
膠體金的應用
膠體金技術既可用于抗原抗體檢測,也可用于體內生物活性物質、激素、半抗原等小分子物質的檢測??蓮V泛應用于動物疫病快速診斷和獸藥殘留快速檢測等領域。
1、在畜禽病毒診斷中可檢測豬瘟病毒抗體、豬藍耳病抗體,此外還能檢測犬瘟熱、狂犬病、乙型肝炎等多種疫病。
2、在寄生蟲病診斷中可檢測吸血蟲病抗體、弓形蟲抗體等疾病抗體。
3、在獸藥殘留中可檢測氯霉素、鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、鏈霉素、四環(huán)素等藥物。
4、在食品安全中可檢測真菌毒素類,例如黃曲霉毒素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、T-2毒素等。
5、在毒品中可檢測嗎啡、冰毒、K粉等。
膠體金試驗流程
1、標記
·用0.2M 碳酸鉀調節(jié)膠體金溶液ph到待標記蛋白等電點略偏堿位置
·加入一定量標記蛋白混勻
·加入BSA或其他穩(wěn)定劑封閉膠體金剩余位點,同時給金標提供一個穩(wěn)定的微環(huán)境
·純化,一般用離心法,是為了去除掉未標記的蛋白以及置換保存液
·干燥,將復溶后的金標蛋白干燥于固相載體上,一般是玻纖紙或聚酯膜
2、包被
將蛋白稀釋到一定濃度用點膜儀包被在NC膜上干燥固定
3、組裝測試
技術詳情
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