干細(xì)胞鑒定主要方法
1、克隆形成率
在細(xì)胞實驗中克隆形成率是評鑒細(xì)胞增殖能力的重要指標(biāo),如誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS)誘導(dǎo)過程中克隆形成率是判定誘導(dǎo)效率的主要指標(biāo)。
2、生長曲線
生長曲線是細(xì)胞增殖的經(jīng)典檢測方式,是細(xì)胞重要的生理指標(biāo),在許多高質(zhì)量的文獻中仍然有較高的采用率。然而,生長曲線的繪制實驗費時、費力,若沒有豐富的經(jīng)驗的良好的質(zhì)量控制其結(jié)果也不可靠。
3、核型分析
細(xì)胞染色體的數(shù)量和重組突變等在體外培養(yǎng)的細(xì)胞中時長發(fā)生,染色體數(shù)量的變化和片段的突變往往使干細(xì)胞研究的結(jié)果發(fā)生偏差,甚至產(chǎn)生錯誤。干細(xì)胞核型分析在許多高質(zhì)量的干細(xì)胞文獻中也作為質(zhì)量控制的重要指標(biāo)。
4、形態(tài)學(xué)鑒定
干細(xì)胞鑒定主要從形態(tài)學(xué)和功能學(xué)兩方面來實現(xiàn)。形態(tài)學(xué)方面的鑒定包括細(xì)胞的顯微形態(tài)、表面標(biāo)記分析(FACS)、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光、化學(xué)染色等。
5、成骨誘導(dǎo)分化
成骨分化是MSC必不可少的功能性鑒定指標(biāo),然而其誘導(dǎo)周期長,注意事項繁多,對經(jīng)驗相對缺乏的操作人員來說時間的浪費是最容易出現(xiàn)的問題。
6、成脂誘導(dǎo)分化
成脂誘導(dǎo)分化也是MSC功能性指標(biāo)之一,在MSC鑒定中不可或缺。
7、三胚層分化實驗
三胚層分化能力是ES和iPS的必備指標(biāo)。體外可以通過擬胚體(EB)形成來驗證,體內(nèi)可以通過裸鼠畸胎瘤進行驗證。
8、微生物檢測
細(xì)菌、真菌污染,將導(dǎo)致細(xì)胞實驗無法繼續(xù);支原體污染不易察覺,但會在研究人員不經(jīng)意間直接影響細(xì)胞的狀態(tài)。因此,對培養(yǎng)細(xì)胞進行無菌檢測是非常重要的工作。
(資料來源:賽業(yè)生物)