技術(shù)概述
酵母是單細(xì)胞低等的真核生物，具有生長(zhǎng)快、成本低、易于遺傳操作，能對(duì)外源蛋白進(jìn)行翻譯后加工和修飾、不產(chǎn)生有毒產(chǎn)物等特點(diǎn)，認(rèn)為是外源蛋白的合適宿主[1]。酵母分為三類：第一是釀酒酵母；第二是栗酒裂殖酵母；第三是非常規(guī)酵母，主要有巴氏畢赤酵母、乳酸克魯維亞酵母等[2]?；蚬こ套钤缡褂玫氖轻劸平湍?，然后又開發(fā)了裂殖酵母（畢赤酵母）、甲醇酵母和克魯維酸酵母，目前應(yīng)用最廣泛地是釀酒酵母和畢赤酵母。
技術(shù)詳情
載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
p416 GPD | GPD | URA3 | 氨芐青霉素 | URA3 | 可供構(gòu)建 |
pESC-ura | GAL1,GAL10 | C-Myc,C-Flag | 氨芐青霉素 | His3,URA3 | 可供構(gòu)建 |
pESC-His | GAL1,GAL10 | C-Myc,C-Flag | 氨芐青霉素 | His3 | 可供構(gòu)建 |
pESC-Leu | GAL1,GAL10 | C-Myc,C-Flag | 氨芐青霉素 | Leu2 | 可供構(gòu)建 |
pYES2-CT | GAL1 | C-His,C-V5 | 氨芐青霉素 | URA3 | 可供構(gòu)建 |
pYES2 | GAL1 | / | 氨芐青霉素 | URA3 | 可供構(gòu)建 |
pYX212 | TPI | C-HA | 氨芐青霉素 | URA3 | 可供構(gòu)建 |
pYC2-CT | GAL1 | C-V5,C-6×His | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
pRS316 | T7 | / | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
pYC2-NT A | GAL1 | N-6×His , N-Xpress,?C-V5 ,C-6×His | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
pYC2-NT B | GAL1 | N-6×His , N-Xpress,?C-V5 ,C-6×His | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
pYC2-NT C | GAL1 | N-6×His , N-Xpress,?C-V5 ,C-6×His | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
pYC16 | TEF1 | GFP | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
pYC25 | TEF1 | YFP | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
pYC119 | TEF1 | C-3×FLAG | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
YCplac22 | Lac | / | 氨芐青霉素 | TRP1 | / |
YCplac33 | Lac | / | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
YCplac111 | Lac | / | 氨芐青霉素 | LEU3 | / |
YEplac112 | Lac | / | 氨芐青霉素 | TRP1 | / |
YIplac128 | Lac | / | 氨芐青霉素 | LEU2 | / |
YEplac181 | Lac | / | 氨芐青霉素 | LEU2 | / |
YEplac195 | Lac | / | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
YIplac204 | Lac | / | 氨芐青霉素 | TRP1 | / |
YIplac211 | Lac | / | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
pYES-DEST52 | GAL1 | 6xHis,?V5 | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
pRS403 | T7 | / | 氨芐青霉素 | His3 | / |
pRS414 | T7 | / | 氨芐青霉素 | TRP1 | / |
pRS415 | T7 | / | 氨芐青霉素 | LEU2 | / |
pRS416 | T7 | / | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
pYES2-EGFP | GAL1 | / | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
pESC-TRP | GAL1,GAL10 | C-Flag, C-Myc | 氨芐青霉素 | TRP1 | / |
pYES6-CT | GAL1 | C-His, C-V5 | 氨芐青霉素 | 殺稻瘟菌素 | / |
pYES3-CT | GAL1 | C-His, C-V5 | 氨芐青霉素 | TRP1 | / |
pYES2-NT?A | GAL1 | N-6×His, N-Xpress, C-6×His, C-V5 | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
?
載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
pPICZαB | AOX1 | C-Myc,C-His | 博來霉素 | HIS4 | / |
pPICZB | AOX1,EM7 | C-Myc,C-His | 博來霉素 | HIS4 | / |
pPIC9K | AOX1 | N-alpha | 氨芐青霉素/卡那霉素 | HIS4 | / |
pPIC9 | AOX1 | N-alpha | 氨芐青霉素/卡那霉素 | HIS4 | / |
pPICZ?A | AOX1 | C-Myc,C-6xHis | 博來霉素 | HIS4 | / |
pGAPZA | GAP | C-Myc,C-6xHis | 博來霉素 | HIS4/博來霉素 | / |
pPink-HC | AOX1 | / | 氨芐青霉素 | ADE2 | / |
pPIC6αC | AOX1 | C-Myc,C-6xHis | 殺稻瘟菌素 | 殺稻瘟菌素 | / |
pPIC6?A | AOX1 | C-Myc,C-6xHis | 殺稻瘟菌素 | 殺稻瘟菌素 | / |
pPIC9k-His | AOX1 | N-alpha,C-6xHis | 氨芐青霉素和卡那霉素 | HIS4 | / |
pPinkα-HC | AOX1 | N-alpha | 氨芐青霉素 | ADE2 | / |
pPIC3.5K | AOX1 | / | 氨芐青霉素和卡那霉素 | HIS4 | / |
pPICZC | AOX1 | N-PHO1 | 氨芐青霉素和卡那霉素 | HIS4 | / |
pMETαA/B/C | AUG1 | C-V5， C-His，N-alpha | 氨芐青霉素 | ADE2 | / |
pMET A/B/C | AUG1 | C-V5， C-His | 氨芐青霉素 | ADE2 | / |
pPink-LC | AOX1 | / | 氨芐青霉素 | ADE2 | / |
pHIL-D2 | AOX1 | / | 氨芐青霉素，卡那霉素 | HIS4 | / |
pHIL-S1 | AOX1 | N-PHO1 | 氨芐青霉素，卡那霉素 | HIS4 | / |
pPICZα A/B/C | AOX1 | C-Myc, C-His | 博來霉素 | HIS4 | / |
pAO815 | AOX1 | / | 氨芐青霉素 | HIS4 | / |
pPIC3.5 | AOX1 | / | 氨芐青霉素 | HIS4 | / |
pPIC9 | AOX1 | / | 氨芐青霉素 | HIS4 | / |
pPR3-N | CYC1 | N-HA | 博來霉素 | TRP1 | / |
酵母單雜交技術(shù)是體外分析DNA與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用的方法[3]，是根據(jù)DNA結(jié)合蛋白與DNA順式作用元件結(jié)合調(diào)控報(bào)道基因表達(dá)的原理來克隆目的轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié)，在細(xì)胞內(nèi)分析鑒定轉(zhuǎn)錄因子和順式作用元件的結(jié)合。酵母單雜交應(yīng)用：鑒別DNA結(jié)合位點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)潛在的結(jié)合蛋白基因；對(duì)DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域進(jìn)行分析[4]
載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
pABAi | URA3 | / | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
pGADT7-Rec | T7,ADH1 | / | 氨芐青霉素 | LEU2 | / |
pHISi | minHIS3 | / | 氨芐青霉素 | URA3 | ? |
pHIS2 | TRP1,T7,T3 | / | 卡那霉素 | TRP1,HIS3 | / |
pHIS2.1 | TRP1 ,T7,T3 | / | 卡那霉素 | TRP1,HIS3 | / |
pLacZi | CYC1 | / | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
酵母雙雜交是通過對(duì)報(bào)告基因的表型進(jìn)行檢測(cè)以實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)間相互作用的研究[5]。酵母基因的轉(zhuǎn)錄由轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子和啟動(dòng)子共同調(diào)節(jié)，酵母轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子由DNA結(jié)構(gòu)域（BD）和轉(zhuǎn)錄激活域（AD）組成，轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子依靠BD結(jié)合基因上游的激活序列（UAS），AD激活下游基因的表達(dá)，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)X、Y分別于BD和AD形成2個(gè)融合蛋白（X-BD、Y-AD），當(dāng)X、Y相互作用時(shí)，與X、Y融合的BD，AD在空間上接近，從而恢復(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的轉(zhuǎn)錄激活作用，激活報(bào)告基因的表達(dá)[6]。酵母雙雜交的應(yīng)用：用已知功能的蛋白質(zhì)基因篩選與cDNA文庫相互作用的新蛋白質(zhì)；研究免疫應(yīng)答的遞呈效應(yīng)和發(fā)病機(jī)理；尋找具有作用的肽類藥物；建立基因組蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)。[7]
載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 | ? |
pACT2-AD | ADH1 | N-HA | 氨芐青霉素 | LEU2 | / | |
pAD-GAL4-2.1 | ADH1 | / | 氨芐青霉素 | LEU2 | / | ? |
pB42AD | GAL1 | N-HA | 氨芐青霉素 | TRP1 | / | ? |
pBT3-C | CYC1 | C-Cub，C-LexA,VP16 | 卡那霉素 | LEU2 | / | |
pBT3-N | CYC1 | N-Cub，N-LexA,VP16 | 卡那霉素 | LEU2 | / | |
pBD-GAL4-Cam | ADH1 | / | 氯霉素 | TRP1 | / | ? |
pDEST32 | ADH1 | / | 慶大霉素 | LEU2 | / | ? |
pGBKT7-Lam | ADH1 | C-Myc | 卡納霉素 | TRP1 | / | ? |
pGADT7 | ADH1 | N-HA | 氨芐青霉素 | LEU2 | / | |
pGADT7-T | ADH1 | N-HA | 氨芐青霉素 | LEU2 | / | |
pGADT7-GW | ADH1 | N-HA | 氨芐青霉素 | LEU2 | / | |
pGBKT7 | ADH1 | C-Myc | 卡納霉素 | TRP1 | / | ? |
pGBKT7-53 | ADH1 | C-Myc | 卡納霉素 | TRP1 | / | ? |
pGBKT7-GW | ADH1 | N-Myc | 卡那霉素 | TRP1 | / | |
pMyr | GAL1 | / | 氯霉素 | URA3 | / | ? |
pNubG-Fe65 | ADH1 | / | 氨芐青霉素 | TRP1 | / | |
pSos-MAFB | ADH1 | / | 氨芐青霉素 | LEU2 | / | |
pSos | ADH1 | / | 氨芐青霉素 | LEU2 | / | |
pPR3-C | ADH1 | C-HA，C-NubG | 氨芐青霉素 | TRP1 | / | |
pPR3-N | CYC1 | N-NubG；N-HA | 氨芐青霉素 | TRP1 | / |
酵母三雜交系統(tǒng)是在酵母雙雜交思想上提出的，酵母三雜交和酵母雙雜交都利用了釀酒酵母細(xì)胞GAL4調(diào)控半乳糖苷酶基因的轉(zhuǎn)錄，酵母三雜交是在酵母雙雜交的基礎(chǔ)上，研究?jī)蓚€(gè)蛋白質(zhì)與第三個(gè)成分間的相互作用，第三個(gè)成分可以是蛋白質(zhì)、RNA或小分子藥物[8]。酵母三雜交的應(yīng)用：在RNA文庫中篩選與已知蛋白相結(jié)合的RNA;在蛋白質(zhì)文庫中篩選與已知RNA相互作用的蛋白質(zhì)；克隆特征未知的蛋白質(zhì)序列；研究RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合體的作用[9]。
載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
pBridge | ADH1 | / | 氨芐青霉素 | TRP1 | / |
載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
pML104 | GAP | / | 氨芐青霉素 | URA3 | / |
pML107 | GAP | / | 氨芐青霉素 | LEU2 | / |
p414-TEF1p-Cas9-CYC1t | TEF1 | / | 氨芐青霉素 | TRP1 | / |
pJH001 | GAP | / | 氨芐青霉素 | LEU2 | / |
1. 宋麗雅等. 幾種主要的酵母表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展[J]. 中國輸血雜志, 2003, 16: 209-211
2. 董清華等. 酵母表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展與展望[J]. 北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào), 2008, 23; 72-75
3. Alexander MK et al. One-hybrid systems for detecing protein-DNA interactions[J]. Methods ?Mol Biol, 2001, 177: 241-259
4. 馬守東等. 酵母單雜交技術(shù)的原理及應(yīng)用[J]. 世界華人消化雜志, 2003, 11:450-451
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