酵母單雜交體系自1993年由Wang和Reed創(chuàng)立以來(lái),在生物學(xué)研究領(lǐng)域中已經(jīng)顯示出巨大的威力。應(yīng)用酵母單雜交體系已經(jīng)驗(yàn)證了許多已知的DNA與蛋白質(zhì)之間的相互作用,同時(shí)發(fā)現(xiàn)了新的DNA與蛋白質(zhì)的相互作用,并由此找到了多種新的轉(zhuǎn)錄因子。近來(lái),已有應(yīng)用酵母單雜交體系進(jìn)行疾病診斷的研究報(bào)道。隨著酵母單雜交體系的不斷發(fā)展和完善,它在科研、醫(yī)療等方面的應(yīng)用將會(huì)越來(lái)越廣泛。采用酵母單雜交體系能在一個(gè)簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,識(shí)別與DNA特異結(jié)合的蛋白質(zhì),同時(shí)可直接從基因文庫(kù)中找到編碼蛋白的DNA序列,而無(wú)需分離純化蛋白,實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單易行。由于酵母單雜交體系檢測(cè)到的與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)是處于自然構(gòu)象,克服了體外研究時(shí)蛋白質(zhì)通常處于非自然構(gòu)象的缺點(diǎn),因而具有很高的靈敏性。
酵母單雜交(Yeast one-hybrid)是根據(jù)DNA結(jié)合蛋白(即轉(zhuǎn)錄因子)與DNA順式作用元件結(jié)合調(diào)控報(bào)道基因表達(dá)的原理,克隆與靶元件特異結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子基因(cDNA)的有效方法。其理論基礎(chǔ)是:許多真核生物的轉(zhuǎn)錄激活子由物理和功能上獨(dú)立的DNA結(jié)合區(qū)(DNA-binding domain BD)和轉(zhuǎn)錄激活區(qū)(Activation domain AD)組成,因此可構(gòu)建各種基因與AD的融合表達(dá)載體,在酵母中表達(dá)為融合蛋白時(shí),根據(jù)報(bào)道基因的表達(dá)情況,便能篩選出與靶元件有特異結(jié)合區(qū)域的蛋白。理論上,在單雜交檢測(cè)中,任何靶元件都可被用于篩選一種與之有特異結(jié)合區(qū)域的蛋白。
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