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雙分子熒光互補(bǔ)(bimolecular fluorescence complementation， BiFC)分析技術(shù)，是由Hu等在2002年最先報(bào)道的一種直觀、快速地判斷目標(biāo)蛋白在活細(xì)胞中的定位和相互作用的新技術(shù)。

該方法利用綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)及其突變體的特性作為報(bào)告基因，將熒光蛋白分割成兩個(gè)不具有熒光活性的分子片段，再分別與目標(biāo)蛋白連接。如果兩個(gè)目標(biāo)蛋白因?yàn)橛邢嗷プ饔枚拷?，就使得熒光蛋白的兩個(gè)分子片段在空間上相互靠近，重新形成活性的熒光基團(tuán)而發(fā)出熒光。在熒光顯微鏡下，就能直接觀察到兩目標(biāo)蛋白是否具有相互作用，并且在最接近活細(xì)胞生理狀態(tài)的條件下觀察到其相互作用發(fā)生的時(shí)間、位置、強(qiáng)弱、所形成蛋白質(zhì)復(fù)合體的穩(wěn)定性，以及細(xì)胞信號(hào)分子對(duì)其相互作用的影響等。

該技術(shù)巧妙地將熒光蛋白分子的兩個(gè)互補(bǔ)片段分別與不同的目標(biāo)蛋白融合表達(dá)，如果熒光蛋白活性恢復(fù)則表明兩目標(biāo)蛋白發(fā)生了相互作用。其后發(fā)展出的多色熒光互補(bǔ)技術(shù)(multicolor BiFC)，不僅能同時(shí)檢測(cè)到多種蛋白質(zhì)復(fù)合體的形成，還能夠?qū)Σ煌鞍踪|(zhì)間產(chǎn)生相互作用的強(qiáng)弱進(jìn)行比較。

目前，該技術(shù)已用于轉(zhuǎn)錄因子，G蛋白βγ亞基的二聚體形式，不同蛋白質(zhì)間產(chǎn)生相互作用強(qiáng)弱的比較以及蛋白質(zhì)泛素化等方面的研究工作上。