哺乳動(dòng)物表達(dá)載體構(gòu)件
2019年8月22日
2條評(píng)論
哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)是由哺乳動(dòng)物細(xì)胞翻譯后再加工修飾產(chǎn)生的外源蛋白，是生產(chǎn)天然蛋白的理想表達(dá)系統(tǒng)，也是應(yīng)用最廣泛地動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)是由哺乳動(dòng)物細(xì)胞翻譯后再加工修飾產(chǎn)生的外源蛋白，是生產(chǎn)天然蛋白的理想表達(dá)系統(tǒng)，也是應(yīng)用最廣泛地動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。
植物表達(dá)載體在植物基因工程中起著至關(guān)重要的作用，構(gòu)建植株表達(dá)載體主要目的是將目的基因進(jìn)行修飾改造，使其轉(zhuǎn)入受體植物后的表達(dá)符合目的需要。
雙分子熒光互補(bǔ)(bimolecular fluorescence complementation，BiFC)分析技術(shù)，是由Hu等在2002年最先報(bào)道的一種直觀、快速地判斷目標(biāo)蛋白在活細(xì)胞中的定位和相互作用的新技術(shù)。
啟動(dòng)子載體，據(jù)啟動(dòng)子序列特性，從基因組中調(diào)取啟動(dòng)子序列，將其構(gòu)建至報(bào)告基因載體中，通過檢測(cè)報(bào)告基因來分析啟動(dòng)子關(guān)鍵區(qū)域；同時(shí)可以通過構(gòu)建一系列截短體啟動(dòng)子和定點(diǎn)突變可以確定關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。
CRISPR Cas9為新型的基因組編輯技術(shù)，擁有操作簡(jiǎn)單，效率高，以及作用靶點(diǎn)多等優(yōu)勢(shì)，逐漸成為基因敲除，基因組突變和基因敲除等實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)操作工具。Cas9系統(tǒng)能在293T, K562, iPS等多種細(xì)胞中，進(jìn)行有效的靶向酶切，
RNA 干擾（RNA interference, RNAi）技術(shù)，是將與內(nèi)源mRNA 編碼區(qū)同源的小片段（19~23 bp）外源雙鏈 RNA（siRNA）導(dǎo)入細(xì)胞中，引發(fā)細(xì)胞中相應(yīng)mRNA 高效特異性降解，從而導(dǎo)致特定基因表達(dá)沉默（knock down）的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
表達(dá)載體（Expression vectors）就是在克隆載體基本骨架的基礎(chǔ)上增加表達(dá)元件（如啟動(dòng)子、RBS、終止子等），使目的基因能夠表達(dá)的載體。如表達(dá)載體pKK223-3是一個(gè)具有典型表達(dá)結(jié)構(gòu)的大腸桿菌表達(dá)載體。
原核表達(dá)系統(tǒng)是將外源cDNA片段克隆到原核表達(dá)載體上然后轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株，在原核生物來表達(dá)外源蛋白的系統(tǒng)，主要包括大腸桿菌表達(dá)、枯草芽孢桿菌表達(dá)、鏈霉素表達(dá)等。